細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用，是人類(lèi)開(kāi)啟生命奧秘大門(mén)的鑰匙。該項(xiàng)技術(shù)的發(fā)展，科學(xué)家們能夠脫離供體的情況下，在實(shí)驗(yàn)室中，研究并分析各種細(xì)胞的生命活動(dòng)。高效的細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)之不易，操作過(guò)程的實(shí)際情況十分復(fù)雜，存在諸多可能會(huì)影響培養(yǎng)效率的因素，包括實(shí)驗(yàn)環(huán)境、實(shí)驗(yàn)材料的選擇等。

一、實(shí)驗(yàn)環(huán)境

細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境需要嚴(yán)格無(wú)菌，甚至是空氣都要使用新風(fēng)系統(tǒng)進(jìn)行過(guò)濾。對(duì)于墻壁、地板、桌面、超凈工作臺(tái)，更是要定期清潔。德國(guó)Minerva Biolabs公司的Mycoplasma-off™ Wipes和Mycoplasma-off™直接用于實(shí)驗(yàn)環(huán)境、物品、儀器、設(shè)備的清潔。該試劑無(wú)需稀釋?zhuān)瑖姙⒒虿潦煤笞匀伙L(fēng)干，即可高效清除環(huán)境中的微生物污染。

細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中，培養(yǎng)箱水槽，水浴鍋經(jīng)常會(huì)有支原體以及各種細(xì)菌、霉菌滋生，稍有不慎或清洗不及時(shí)，水槽中的水源即會(huì)成為細(xì)胞污染的重要來(lái)源。保持水槽的潔凈，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的順利進(jìn)行非常重要。推薦：全球眾多實(shí)驗(yàn)室日常都在使用德國(guó)MB公司生產(chǎn)的Water Shield™支原體污染防護(hù)劑（水槽用）。Water Shield™可持續(xù)作用四周，使水源避免受到支原體、細(xì)菌、真菌、霉菌、孢子的污染。按1:200的比例，加到水浴鍋或培養(yǎng)箱水盤(pán)的無(wú)菌水中即可

二、實(shí)驗(yàn)材料的選擇

所培養(yǎng)的細(xì)胞，來(lái)源應(yīng)清晰，確保無(wú)污染。對(duì)于培養(yǎng)試劑及耗材，也盡可能選擇無(wú)菌的。

細(xì)胞離不開(kāi)高品質(zhì)血清。而胎牛血清作為天然的培養(yǎng)基，在培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中占有重要位置。選擇胎牛血清的重要指標(biāo)之一，就是考察內(nèi)毒素的含量。

內(nèi)毒素在細(xì)胞傳代增殖過(guò)程中，會(huì)直接參與細(xì)胞凋亡的過(guò)程，一定劑量下，會(huì)給細(xì)胞培養(yǎng)帶來(lái)很多問(wèn)題，特別是免疫細(xì)胞和干細(xì)胞，例如：誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子，抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。因此，血清中內(nèi)毒素含量越低，對(duì)細(xì)胞毒性越小，越利于細(xì)胞的生長(zhǎng)和傳代；反之，內(nèi)毒素含量過(guò)高，會(huì)直接導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不良，提前老化，甚至死亡。

基于以上研究，用于細(xì)胞培養(yǎng)的牛血清，要通過(guò)嚴(yán)格的內(nèi)毒素水平檢測(cè)，每一批血清都有完整的檢測(cè)報(bào)告，通過(guò)內(nèi)毒素的檢測(cè)數(shù)值，對(duì)血清的品質(zhì)進(jìn)行分級(jí)和評(píng)估。

目前國(guó)際通用的分級(jí)方法，均以?xún)?nèi)毒素含量的高低來(lái)確定，內(nèi)毒素含量越低，血清的級(jí)別就越高，以胎牛血清為例：

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時(shí)，此血清為特級(jí)胎牛血清；

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml，≤ 25EU/ml時(shí)，此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清；

當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≥25EU/ml時(shí)，此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清；

Ausbian®進(jìn)口特級(jí)胎牛血清，澳洲血源，均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格篩選， 目前所有批次內(nèi)毒素都低于3EU/ml，其中有的批次可以低至≤1EU/ml。更低的內(nèi)毒素血清，更利于細(xì)胞的生長(zhǎng)和傳代。