通常，如果懷疑細(xì)胞有支原體污染，可直接取細(xì)胞上清進(jìn)行支原體PCR檢測。因?yàn)榇嬖谥гw污染的細(xì)胞上清中，支原體密度為通常為10^6-10^8個(gè)/ml，已足以用于PCR檢測。

Minverva公司生產(chǎn)的支原體PCR試劑盒靈敏度高，特異性好，檢測的支原體種類多，很受用戶的歡迎。

但有時(shí)，支原體檢測前，還需對樣品中的支原體DNA進(jìn)行提取。那么，什么時(shí)候需要提取呢？

支原體提取與支原體檢測

當(dāng)出現(xiàn)以下幾種情況時(shí)，建議大家在進(jìn)行支原體qPCR前，先進(jìn)行提取支原體提取。

1、細(xì)胞培養(yǎng)液中存在抑制PCR的物質(zhì)，這時(shí)就需要提取。細(xì)胞培養(yǎng)基中的血清濃度如果超過12%，那么對下游的PCR反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生抑制。酚紅，對熒光定量PCR的檢測也會(huì)干擾。這些均可以通過使用Miverva公司的支原體DNA提取試劑盒來克服。

2、對于樣品類型是細(xì)胞團(tuán)、疫苗、凍存細(xì)胞和石蠟包埋的組織，也需要提前提取DNA。

3、另外，如果樣品中蛋白含量高于10mg/ml，則先需要用蛋白酶K進(jìn)行處理。

好物推薦

Minerva

Venor®GeM Sample Preparation Kit

貨號：56-1010

該試劑盒可從細(xì)胞上清和生物制品中分離支原體DNA，全程只需30分鐘。該試劑盒符合歐洲藥典規(guī)范。

分四步組成：

• 細(xì)胞溶解

• DNA特異性與層析柱結(jié)合

• 祛除殘留的污染物和抑制劑

• 洗脫DNA。

需要注意的是，常規(guī)細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的DNA提取試劑盒是否能用于支原體DNA提取，值得懷疑。因?yàn)槿绻继崛〕鰜恚瑒t會(huì)對下游PCR檢測帶來干擾。總之，提取后的DNA應(yīng)具有一定的純度和產(chǎn)率。