對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)而言，血清的重要性顯而易見(jiàn)。它含有包括生長(zhǎng)因子在內(nèi)的蛋白、氨基酸、脂類、碳水化合物、維生素及其他成份，可以促進(jìn)貼壁或懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)和維持。胎牛血清（FBS）是細(xì)胞培養(yǎng)常用的血清。

隨著生物學(xué)研究的迅猛發(fā)展，對(duì)血清的需求也越來(lái)越多，加上進(jìn)口運(yùn)輸成本增加等等各種原因，進(jìn)口血清的價(jià)格在國(guó)內(nèi)也是悄悄地蹭蹭地，站到了“不菲”的價(jià)位。

使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鐘。滅活的目的是去除血清中的補(bǔ)體成分，避免補(bǔ)體對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。血清經(jīng)過(guò)滅活也會(huì)損失一些對(duì)細(xì)胞有利的成分，如生長(zhǎng)因子，因此也有人提出血清不經(jīng)滅活直接用于培養(yǎng)，這樣做的前提是確認(rèn)血清中不含補(bǔ)體成分。對(duì)于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。

儲(chǔ)存條件：血清一般儲(chǔ)存于－20℃，同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。購(gòu)買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲(chǔ)存于－20℃，使用前融化。融化時(shí)最好現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長(zhǎng)時(shí)間存放，應(yīng)盡快使用。

使用濃度：自從有了合成培養(yǎng)基，血清就是作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用，使用濃度一般為5－20％，常用是10％。過(guò)多血清容易使培養(yǎng)中的細(xì)胞發(fā)生變化，特別是一些二倍體的無(wú)限細(xì)胞系，迅速生長(zhǎng)之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。 采購(gòu)血清時(shí)，最好先從供應(yīng)商處索取樣品進(jìn)行試驗(yàn)，選定一批后就要保留足夠使用6個(gè)月至1年的量，直至用另一批經(jīng)過(guò)預(yù)先試驗(yàn)的樣品代替。

 

與4℃過(guò)夜法相比,三步法為什么對(duì)血清更好呢？重點(diǎn)有二！

其一：關(guān)系到沉淀出現(xiàn)的幾率！

記得嗎？血清在融化過(guò)程中，瓶子里冰塊的底部你會(huì)看見(jiàn)亮亮的蛋白絲在下沉，如同蜂蜜溶于水時(shí)的亮線，這就是血清中大量的蛋白在快速融化，而水的熔點(diǎn)高于蛋白，融化的速度是比蛋白慢的。（回想一下高級(jí)冰淇淋和大棒冰的區(qū)別，你懂得！）試想，如果采用4℃過(guò)夜的方法，1瓶500毫升的血清融化好，大約需要10小時(shí)左右，蛋白先融化，沉降在瓶子的底部，水融化的速度比蛋白慢，于是造成大量蛋白溶于少量的水，此時(shí)就很容易有一些蛋白飽和析出，（大多是脂蛋白和纖連蛋白），這就是血清融化中產(chǎn)生沉淀的重要原因之一。

采用三步法，只要2.5個(gè)小時(shí)，溫和有效地加快了水融化的速度，另一方面，融化過(guò)程中可以間斷輕輕搖擺瓶子，讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節(jié)約了時(shí)間，而且最大限度減少了血清沉淀出現(xiàn)的幾率。

 

血清融化過(guò)程中，蛋白質(zhì)會(huì)比水先融化。冰塊底部亮亮的細(xì)絲就是融化中的蛋白

其二：血清在培養(yǎng)細(xì)胞中，最重要的是利用它的活性的因子，因此，融化過(guò)程中最大限度地保留因子的活性，就變得非常重要。回憶一下，細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)，要保持細(xì)胞的活性，我們是要遵循“快融”原則還是“慢融”原則呢？快融！血清同樣如此！三步法需要兩個(gè)半小時(shí)，4℃過(guò)夜需要大約10個(gè)小時(shí)（冰箱一般設(shè)2-8℃，所以各實(shí)驗(yàn)室融化時(shí)間會(huì)稍有出入）。哪個(gè)速度對(duì)保留活性更好？不言而喻！

下面，我們?cè)敿?xì)解讀『血清的三步融化法』的步驟：

 

圖：剛從-28℃拿出的血清，是這個(gè)樣子的

融化血清第一步

溫度：室溫

時(shí)間：100ml - 35分鐘

500ml - 90分鐘

1000ml - 100分鐘

或

溫度：15-20℃水浴（新接的自來(lái)水24℃上下）

時(shí)間：100ml - 5分鐘

500ml - 18分鐘

1000ml - 20分鐘

 

圖：這是最近Ausbian血清的大區(qū)經(jīng)理周博，在天津血研所實(shí)驗(yàn)室拍到的——實(shí)驗(yàn)人員三步法化血清的圖片，為了節(jié)約時(shí)間，實(shí)驗(yàn)人員采取的是第一步20℃水浴18min的方法。（用現(xiàn)接的自來(lái)水放入冰凍的血清，即可達(dá)到20℃水浴的效果。一般實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有能制冷到20℃的水浴鍋）

融化血清第二步

溫度：20℃水浴（新接的自來(lái)水24℃上下）

時(shí)間：100ml - 15分鐘

500ml - 25分鐘

1000ml - 30分鐘

 

圖：第二步，仍舊是新接的自來(lái)水浴，25min

融化血清第三步

溫度：37℃水浴

時(shí)間：100ml - 20分鐘

500ml - 35分鐘

1000ml - 45分鐘

 

第三步，將血清置于37℃水浴鍋中進(jìn)行融化，大約30nmin左右，血清就*融化，可以分裝了。

 

 

圖：大家看，使用三步法融化的血清十分清亮，養(yǎng)細(xì)胞的效果也是棒棒噠。

注意

1.在水浴過(guò)程中，血清的平面要*浸在水中。在融化過(guò)程中要慢慢搖動(dòng)，使血清混勻，但不要產(chǎn)生泡沫！

2.胎牛血清不推薦熱滅活。

3.此三步法適用于所有品牌、所有級(jí)別的進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)血清，均可讓血清在減少沉淀、保留活性、提高細(xì)胞培養(yǎng)效果方面，得到不同程度的提高！

看到這里，你是不是迫不及待的想試試融化血清的三步法了呢？其實(shí)，想快速得到高品質(zhì)的血清，除了科學(xué)的融化方法，自身品質(zhì)出眾的血清，完備的運(yùn)輸冷鏈，貼心的售后服務(wù)，這些都是*的！

Ausbian®特級(jí)胎牛血清所有血清出廠前，均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)控，每個(gè)批次附有詳細(xì)完整的《檢測(cè)報(bào)告》，包括：品名，貨號(hào)，批號(hào)，血源地，生產(chǎn)日期，保質(zhì)期，pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無(wú)菌檢查（細(xì)菌、真菌、支原體）、病毒檢查（如BVD、牛腺病毒、細(xì)胞病變效應(yīng)等）、促細(xì)胞生長(zhǎng)能力、細(xì)胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

實(shí)驗(yàn)人對(duì)于新批次血清，應(yīng)認(rèn)真審閱《檢測(cè)報(bào)告》，做好試用前篩選第一步。（如何看懂《檢測(cè)報(bào)告》，可登陸“締一生物”網(wǎng)站，留言技術(shù)部，得到免費(fèi)幫助。）

 

它在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)經(jīng)歷十幾年，被眾多科研工業(yè)客戶反復(fù)選擇，也是細(xì)胞典藏等重大項(xiàng)目十幾年的供應(yīng)品牌