培養(yǎng)基

1、培養(yǎng)基的選擇依細胞種類而定。如果是從別的實驗室借來的細胞，最初階段一定要保持細胞原有的培養(yǎng)條件；特殊種類的細胞，比如內(nèi)皮細胞，可以借鑒網(wǎng)上培養(yǎng)成功的條件，添加一些特定成分。

2、液體培養(yǎng)基的保存條件應(yīng)是冰箱4度冷藏。小六兒見過有的大實驗室細胞量多，一次性購買的培養(yǎng)基瓶數(shù)也多，有些人可能覺得-20冰箱保存時間會更久一些。但是經(jīng)過冷凍后的培養(yǎng)基再溶化時，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的顏色發(fā)生變化，顏色變深，這就是培養(yǎng)基的PH值升高了。

3、培養(yǎng)基中都含有大量的谷氨酰胺，用來合成細胞生長所需要的核酸和蛋白質(zhì)。但是谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定，保存4周后的培養(yǎng)基需要重新加入谷氨酰胺。所以盡量不要大批量購買培養(yǎng)，也不要一次配太多的培養(yǎng)基。

4、細胞適合的培養(yǎng)基PH值是7.2-7.4，偏高或偏低都不好，但相對于堿性條件而言，細胞更耐酸。原代細胞對PH值的變化很敏感，而永生性細胞相對來說忍受力更強一些。

5、造成皿或瓶內(nèi)培養(yǎng)基PH值變化的原因有很多：細胞增殖速度的快慢、孵箱內(nèi)二氧化碳的濃度不準確、培養(yǎng)瓶的蓋子擰緊或者發(fā)生了污染。如果發(fā)現(xiàn)細胞生長過慢，刨除細胞本身狀態(tài)的原因，可以在培養(yǎng)液中添加丙酮酸鈉（丙酮酸鈉是糖酵解的中間產(chǎn)物，為細胞生長提供ATP，提供合成大代謝所需要的碳源，使用濃度通常是0.1mM）。

6、細胞發(fā)生污染，培養(yǎng)基的PH值也會發(fā)生變化。如果新配置的培養(yǎng)基出現(xiàn)沉淀，很可能是廣口瓶沒有清洗干凈，瓶中殘留的磷酸鹽造成培養(yǎng)基成分的析出。

7、孵箱內(nèi)濕度對維持培養(yǎng)基的滲透壓也有很重要的作用。大部分細胞適應(yīng)的滲透壓在260-320mOsm/kg。濕度不夠時，培養(yǎng)基蒸發(fā)，液體的滲透壓就會升高。

8、培養(yǎng)基在使用前需提前從冰箱拿出，使其恢復至室溫或者37度水浴。

9、操作過程中，如果槍頭中已經(jīng)有培養(yǎng)基或其他液體成分，不要再經(jīng)過酒精燈被高溫加熱。高溫不僅會使有效成分失效，更有可能產(chǎn)生有毒物質(zhì)。

10、我們購買的培養(yǎng)基瓶上都會標注避光保存，這是因為培養(yǎng)基中的某些成分遇光會產(chǎn)生過氧化氫，具有細胞毒性。我們在超凈臺中處理細胞時，因為時間較短，不會產(chǎn)生太大問題。但是如果長時間放置在室外或燈光下照射，或者有的冷藏冰柜的門是玻璃的，就會造成培養(yǎng)基質(zhì)量的下降。

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