雖然，雜交瘤細胞的生長依賴于外源性營養(yǎng)物質(zhì)的補充，如：血清、白蛋白、水解產(chǎn)物、蛋白質(zhì)等，但是，仍可應(yīng)用化學(xué)合成的TurboDoma培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)?？傊?，你目前使用的培養(yǎng)基中營養(yǎng)補充成分越少，細胞從這種蛋白依賴型培養(yǎng)基過渡到適應(yīng)TurboDoma*無蛋白培養(yǎng)基的速度就會越快。本文締一生物/締一生物為您來分析雜交瘤培養(yǎng)基推薦使用方法。

1.通過離心過濾（380轉(zhuǎn)，3分鐘）采集細胞后，加入TurboDoma培養(yǎng)基，使細胞能夠再次懸浮，且細胞密度應(yīng)達到1 x 105/ml，如：將2 x 106 細胞接種在75 cm2細胞培養(yǎng)瓶中，加入20 ml TurboDoma培養(yǎng)基。如果，培養(yǎng)基的pH值低于支持細胞生長的范圍，即pH值< 7.0，培養(yǎng)基的顏色從橘紅變?yōu)榈S，這時，需另加入20 ml新鮮培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基體積增大一倍。上述情況通常在接種后3-4天出現(xiàn)。

2.注意觀察細胞生長時的狀態(tài)。細胞培養(yǎng)4-5天內(nèi)，由于細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的丟失，會導(dǎo)致大量細胞的死亡。但是，仍有一些代謝活躍的細胞能夠很快適應(yīng)新的生長環(huán)境。

3.正在生長的細胞由于乳酸的產(chǎn)生會引起pH值的下降。當(dāng)培養(yǎng)基的pH值低于支持細胞生長的范圍時，倒出50%的培養(yǎng)基，然后，再加入50%新鮮的培養(yǎng)基，繼續(xù)進行培養(yǎng)。如果更換培養(yǎng)基的間隔時間越來越短，例如：細胞表現(xiàn)出旺盛的代謝能力，那么，就可增加新鮮培養(yǎng)基的量，直至將剩余的培養(yǎng)基全部換為新的培養(yǎng)基。

4.為了細胞增殖能夠達到滿意的效果，必須保證培養(yǎng)過程中使用相同的培養(yǎng)瓶。而且，我們建議：在細胞適應(yīng)TurboDoma培養(yǎng)基的過程中，要頻繁地更換培養(yǎng)液，不要急于傳代。細胞需要逐漸適應(yīng)新的培養(yǎng)環(huán)境。

5.懸浮細胞生長時，zui初，可能會形成50個細胞左右的細胞團，大小不一。漸漸地，細胞團慢慢消失，細胞逐漸擴散增殖。對于懸浮細胞的傳代培養(yǎng)，可通過稀釋培養(yǎng)液或加入新鮮培養(yǎng)基來進行。

注意：細胞培養(yǎng)過程中，為了能夠使細胞在24小時內(nèi)進入正常生長周期，必須等細胞生長密度達到一定程度時才可分瓶，進行傳代培養(yǎng)！

綜上所述，您是不是已經(jīng)對雜交瘤培養(yǎng)基推薦使用方法，有所了解。如果還有其他疑問，請咨詢締一生物/締一生物資深專家。